%0 Journal Article 
%A Linares Fernández, Sergio
%T Aislamiento de cromosomas del lenguado senegalés (Solea senegalensis, Kaup 1858) mediante técnicas de microdisección láser.
%D 2015
%U http://hdl.handle.net/10498/17614
%X El lenguado senegalés (Solea senegalensis, Kaup 1858) es un pez plano, asimétrico  y ovalado que vive en el fondo marino de la costa atlántica y mediterránea del suroeste de Europa y noroeste de África.
El interés en la producción de Solea senegalensis se ha incrementado, ya que es una especie muy cotizada por el mercado europeo. Este interés ha dado lugar a la puesta a punto de su producción en acuicultura, asimismo ha desencadenado en los últimos años un aumento en la investigación de las bases genéticas de la especie: identificación y secuenciación de genes, realización de mapas físicos, mapas citogenéticos, para así aplicarlo a programas de mejora. 
Todo esto se está desarrollando gracias a técnicas como la secuenciación de nueva generación (NGS), que permite conocer la secuencia de ADN, la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para amplificar secuencias de ADN, la Hibridación Fluorescente in situ (FISH) para poder localizar físicamente en un cromosoma una secuencia marcada, la microdisección que es de utilidad para poder aislar cromosomas determinados y la DOP-PCR una técnica molecular que permite amplificar grandes regiones de ADN sin necesidad de conocer la secuencia y que, posteriormente, permite marcar el producto de DOP-PCR generado para la realización del pintado cromosómico mediante FISH.
Por tanto, la puesta a punto de estas técnicas en el lenguado senegalés es necesaria para obtener mejores resultados en investigación. El presente trabajo se centró en la mejora de algunas técnicas, especialmente se centró en la extensión de las preparaciones cromosómicas, para continuar con la optimización de la técnica de microdisección láser y DOP-PCR a partir del material microdiseccionado. 
El proceso de optimización de las técnicas se basó en tres partes. En primer lugar se realizó la mejora de la técnica para la obtención de placas metafásicas variando las condiciones y protocolos de extensión. Primero se realizó  en portaobjetos de vidrios convencionales y segundo en portaobjetos especiales para microdisección con una membrana de Tereftalato de polietileno (PET). Se continuó con  la mejora de la técnica y condiciones para la microdisección láser del microscopio implementando una metodología de corte y ajuste de los parámetros de corte como la energía, la velocidad, el número de ciclos de corte, el enfoque del corte y el catapultado o lanzamiento de la sección cortada con un impulso láser a un tubo de PCR. Por último, se continuó con la mejora de las condiciones de la DOP-PCR. Se Utilizaron dos tipos de polimerasa, una termosensible y otra termolábil, cada una con su procedimiento. Además se ajustó la cantidad de cromosomas necesarios para una amplificación satisfactoria.

%K Lenguado senegalés
%K Solea senegalensis
%K Microdisección
%K Láser
%K cromosomas
%K chromosomes
%K Laser
%K microdissection
%K preparaciones citogenéticas
%K metaphase spreading
%K DOP
%K PCR
%K PET
%K Optimización
%K optimization
%K Kaup 1858
%K flatfish
%K pez plano
%K corte
%K cutting
%K mejora
%K improvement
%K Aislamiento
%K isolation
%K Cromosómico
%K chromosomal
%~ Universidad de Cádiz