http://hdl.handle.net/10498/17351 2026-05-20T06:25:32Z http://hdl.handle.net/10498/31600 Diseño de Procesos Automáticos para Bioensayos de Toxicidad con Microalgas en Microplaca Reyes Alcalde, Mar Isabel Los bioensayos de toxicidad evalúan los efectos de potenciales contaminantes sobre organismos biológicos para entender el efecto que tendrían en los ecosistemas, permitiendo así la implementación de normativas medioambientales para regular los niveles de estas sustancias en el entorno natural. En concreto, las microalgas son uno de los organismos recomendados para estos estudios, puesto que son muy sensibles ante los contaminantes y constituyen la base de las redes tróficas, siendo un pilar esencial en los ecosistemas acuáticos. Sin embargo, la sensibilidad a estas sustancias puede depender de la especie empleada, con lo que la toxicidad podría ser infravalorada. Por otra parte, aunque las microplacas se emplean cada vez más en estos ensayos, no hay estudios que avalen la validez y fiabilidad de su uso junto con sistemas automáticos de pipeteo. Por ello, en este trabajo se han realizado bioensayos de toxicidad en microplaca mediante automatización en microalgas marinas, con la finalidad de evaluar las diferencias de sensibilidad entre especies y las posibles limitaciones de la automatización y las microplacas en los ensayos de toxicidad. 2021-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10498/31244 Integración de residuos hidrolizados enzimáticos y de residuos de fermentación oscura para producir Polihidroxialcanoatos y Ácido Poliláctico. Cerrato Ruiz, Vicente En el marco del desarrollo de economías circulares y de la correcta gestión de residuos con el fin de minimizar el impacto ambiental de la actividad humana, diferentes alternativas surgen en los últimos tiempos para sustituir a productos derivados del petróleo, entre ellos los plásticos. La acumulación de residuos plásticos en el medio natural es uno de los retos principales a afrontar actualmente. Además, las dificultades asociadas al proceso de reciclaje de plástico ponen de manifiesto la necesidad de encontrar una alternativa a los plásticos derivados del petróleo. Buenos candidatos para sustituir a los plásticos derivados del petróleo, no biodegradables, son los bioplásticos constituidos por polímeros tales como los polihidroxialcanoatos (PHAs) y el ácido poliláctico (PLA). Ambos polímeros pueden ser sintetizados a través de procesos biológicos. Sin embargo, para que estas alternativas puedan competir con los plásticos derivados del petróleo, los costes de producción deben reducirse hasta niveles similares a los de producción de dichos plásticos. Así, una de las estrategias para alcanzar este objetivo es el empleo de residuos como sustrato para la síntesis de los PHAs y PLA. En el presente trabajo se estudia la viabilidad y el rendimiento en la producción de PHAs a partir de dos residuos agotados, de bajo contenido en materia orgánica biodegradable, procedentes de dos procesos biológicos como son la fermentación oscura (a partir de la cual se obtienen ácidos grasos volátiles como precursores de bioplásticos) y la hidrólisis y fermentación láctica (proceso del que se obtiene ácido láctico, precursor del ácido poliláctico). Así, partiendo de cosetas agotadas de remolacha azucarera, se procede a emplear el residuo sólido generado en la fermentación oscura de cosetas en el proceso de hidrólisis y fermentación láctica separadas. Al mismo tiempo, se procede a emplear el residuo generado en la hidrólisis y fermentación láctica separadas de cosetas agotadas de remolacha en el proceso de fermentación oscura. Tras el trabajo realizado, se pone de manifiesto la posibilidad de prescindir de una fracción considerable (35 %) de la materia prima empleada para la producción de azúcares reductores durante la hidrólisis enzimática. De igual manera, se pone de manifiesto la posibilidad de alcanzar ligeras mejoras en la producción de la concentración final de ácido láctico cuando se emplea como sustrato el residuo sólido de la fermentación oscura, en comparación con un sustrato conformado en su totalidad por cosetas agotadas de remolacha azucarera. Por tanto, para las condiciones ensayadas, la integración del residuo sólido de la fermentación oscura en el proceso de hidrólisis y fermentación separadas ha reportado buenos resultados. No ocurre lo mismo en cuanto a la integración del residuo sólido generado en la hidrólisis y fermentación láctica en el proceso de la fermentación oscura, donde se obtuvieron rendimientos muy bajos empleando este sustrato. Por ello, para las condiciones ensayadas, el presente trabajo supone un paso más en el avance hacia la optimización del proceso productivo de ácido polilático, valorizando además un residuo agroalimentario como son las cosetas agotadas de remolacha azucarera. 2021-02-25T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10498/29646 Determinación del perfil venómico en Varioconus mercator y especies afines (Gastrópoda, Conidae) mediante HPLC/MS. Flores Arias, Héctor Los caracoles cono son moluscos venenosos marinos pertenecientes a la familia Conidae, con casi 1000 especies descritas hasta ahora. Su veneno es un cóctel de cientos de compuestos formados principalmente por pequeños péptidos conocidos como conotoxinas. En este estudio realizamos un estudio comparativo de la composición del veneno de dos formas de Varioconus mercator. Esta especie es una especie polimórfica, que presenta hasta 7 formas bien diferenciadas en cuanto a las características y patrones de coloración de su concha. En este trabajo se ha abordado el estudio proteómico comparativo de las formas cacao y stimpsonorum. Para ello se han utilizado técnicas complementarias de espectrometría de masas para el análisis del perfil de veneno: LC/MS y LC-MS/MS y herramientas bioinformáticas (ConoServer). Como resultado, ha sido posible identificar un total de 211 conotoxinas. De ellas, 109 conotoxinas corresponden a la forma cacao y 112 corresponden a la forma stimpsonorum. Las superfamilias de conotoxinas más abundantes y representadas en ambas especies son, por orden decreciente, las superfamilias M (f. cacao: 11%; f. stimpsonorum: 19%), O1 (f. cacao: 21%; f. stimpsonorum: 20%) y T (f. cacao: 17%; f. stimpsonorum: 10%). Las diferencias más significativas se encontraron en Varioconus mercator f. stimpsonorum, donde la superfamilia M estaba sobreexpresada en comparación con f. cacao, y en la superfamilia T, donde ocurre lo contrario: ésta se encuentra sobreexpresada con respecto a f. stimpsonorum. Por otra parte, se ha abordado el estudio teórico de las conotoxinas identificadas mediante modelización molecular utilizando el programa Alphafold2. Las estructuras 3D predichas se han comparado con las existentes en la base de datos UniProt mediante el uso de la herramienta bioinformática RUPEE (portal de uso libre). En base al porcentaje de similitud entre las estructuras modelizadas y las coincidencias de UniProt de modo de acción conocido se han propuesto potenciales modos de acción. Estos compuestos podrían servir como pistas para el desarrollo de nuevos fármacos. 2022-07-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10498/27714 Determinación del Perfil Venómico en Varioconus guanche (Gastrópoda, Conidae) Mediante HPLC/MS Cano Caballero, María del Mar En las últimas décadas los animales venenosos han despertado gran interés por parte de la comunidad científica como fuente de moléculas para el desarrollo de nuevos fármacos y bioinsecticidas. En muchos de los venenos, los componentes activos principales son pequeños péptidos que debido a su alta potencia, selectividad y estabilidad biológica son candidatos ideales para la búsqueda de nuevos fármacos. Los caracoles cono (familia Conoidea, orden Neogastrópoda) son un amplio y diverso grupo de gasterópodos marinos depredadores caracterizados por poseer un sofisticado aparato venenoso, formado por un diente radular modificado similar a un arpón, altamente especializado y gracias al cual inyectan a sus presas un veneno de composición muy compleja. Este veneno se compone principalmente de pequeños péptidos llamados conotoxinas, además de hormonas y otras proteínas. Las conotoxinas presentes en el veneno de estos caracoles marinos tienen un gran potencial farmacológico debido a su alta especificidad y afinidad por canales iónicos, receptores y transportadores del sistema nervioso humano. Este trabajo se centra en el estudio proteómico del veneno de Varioconus guanche (Lauer, 1993), un pequeño cono vermívoro descrito inicialmente como un endemismo de las Islas Canarias, pero cuya área de distribución incluye también las costas del sur de Marruecos, Sáhara Occidental y Mauritania. En este estudio se emplearon los conductos venenosos de 8 especímenes recolectados en Fuerteventura (Islas Canarias). Los extractos venenosos obtenidos se analizaron mediante las técnicas RP-HPLC/MS y LC-MS/MS. Para la identificación de los péptidos, los datos experimentales obtenidos mediante RP-HPLC/MS se analizaron con una base de datos elaborada a partir de los transcriptomas del conducto del veneno de 3 especies de Varioconus (guanche, mercator y reticulatus) y las secuencias modificadas con las PTM correspondientes establecidas con herramientas del portal bioinformático ConoServer. Por otro lado, los datos obtenidos mediante LC-MS/MS se cruzaron con una base de datos que contenía todas las secuencias de conotoxinas de ConoServer, las secuencias maduras de todos los transcriptomas de glándulas de veneno de caracoles conos publicados hasta la fecha (2022), las secuencias buscadas en las bases de datos del NCBI y UniProt utilizando el término "conotoxina", y una serie de secuencias de proteínas altamente conservadas encontradas recientemente en animales venenosos, denominadas "metavenom network protein"; lo que supone un total de 20.052 secuencias.; In recent decades venomous animals have generated much interest in the scientific community as a natural source of molecules for the development of new drugs and bioinsecticides. For most venoms the main active components are small peptides that due to their high potency, selectivity and biological stability are ideal candidates as leads for the search for new drugs. Cone snails (family Conoidea, order Neogastropoda) are a wide and diverse group of predatory marine gastropods characterised by a sophisticated venom system, formed by hollow harpoon-like radular teeth, which inject a complex venom mixture to their preys. This venom is mainly composed of small peptides named as conotoxins, in addition to hormones and other proteins. Conotoxins display a great pharmacological potential due to their high specificity and affinity for ion channels, receptors and transporters of the human nervous system. This study focuses on the proteomic study of the venom of Varioconus guanche (Lauer, 1993), a small vermivorous cone snail initially described as endemic from the Canary Islands, but whose distribution range also includes the southern coasts of Morocco, Western Sahara and Mauritania. In this study the venom ducts of 8 specimens collected in Fuerteventura (Canary Islands) were used. The venom extracts obtained were analyzed using RP-HPLC/MS and LC-MS/MS techniques. For the identification of peptides, the experimental data obtained by RP-HPLC/MS were compared against a database containing the venom duct transcriptomes of 3 species of Varioconus, namely guanche, mercator and reticulatus. The database was built with the aid of the bioinformatic web tool ConoServer for the sequences with PTM. On the other hand, the data obtained by LC-MS/MS were cross-referenced with a database containing all ConoServer conotoxin sequences, the mature sequences of all cone snail venom gland transcriptomes published to date (2022), the sequences obtained from the NCBI and UniProt data bases using the term "conotoxin", and a series of highly conserved protein sequences recently found in venomous animals, called "metavenom network protein"; the database comprises a total of 20052 sequences. 2022-09-01T00:00:00Z