Alternative methods for sampling and preservation of photosynthetic pigments and tocopherols in plant material from remote locations

Abstract

Los métodos actuales para el estudio de pigmentos implican la congelación en nitrógeno líquido y el almacenamiento a -80 °C o la liofilización hasta el análisis por HPLC. Estos requisitos restringen en gran medida la investigación ecofisiológica en áreas remotas donde esos recursos apenas están disponibles. Nuestro objetivo era superar tales limitaciones desarrollando varias técnicas que no requirieran congelación ni liofilización. Se eligieron dos especies con características foliares contrastantes (Olea europaea y Taraxacum officinale). Se diseñaron, optimizaron y probaron siete métodos de conservación en una prueba de campo. Estos protocolos se compararon con un control congelado inmediatamente después de la recolección. Los pigmentos y tocoferoles se analizaron mediante HPLC. Los principales artefactos fueron la epimerización o feofitinización de la clorofila, la isomerización de los carotenoides, la alteración del índice de deepoxidación y la degradación de los tocoferol. Entre todos los métodos, la desecación de muestras en gel de sílice proporciona muestras robustas (la composición del pigmento no se vio afectada por el tiempo o la temperatura de almacenamiento) y perfiles de pigmento casi inalterados, excepto por un cambio en el estado de epoxidación. Aunque se prefirió la congelación con nitrógeno líquido y la posterior liofilización o almacenamiento en congelador, cuando estas instalaciones no están disponibles o no son adecuadas para el transporte a larga distancia, se puede realizar la desecación con gel de sílice, la extracción pasiva en acetona y/o el almacenamiento de muestras frescas en atmósferas saturadas de vapor de agua permiten una caracterización completa de los pigmentos. Se recomienda gel de sílice para la conservación de muestras a largo plazo.