Análisis multi-ómico en gónadas de Solea senegalensis perspectivas moleculares de la reproducción en individuos salvajes y F1

Abstract

This doctoral thesis, focused on the species Solea senegalensis (Kaup, 1858), advances the understanding of the molecular mechanisms regulating reproduction by providing evidence of processes associated with reproductive dysfunction in captive-bred individuals. This species, of high economic relevance for European and Mediterranean aquaculture, faces major reproductive limitations under controlled farming conditions, particularly in males, which restricts the consolidation of a fully closed production cycle. Using an integrative multi-omics approach, this thesis combines transcriptomic, proteomic, and DNA methylation analyses of gonadal tissue from males and females of different origins (wild and F1), with the aim of characterizing the biological pathways underlying gonadal maturation and identifying dysregulated processes associated with domestication. Transcriptomic analysis identified gene networks involved in sexual differentiation, steroidogenesis, and cell communication, demonstrating that sexual maturity and fertility do not rely exclusively on structural genes but rather on coordinated regulation across metabolic and neuroendocrine pathways. Comparative proteomic analysis revealed significant differences in protein expression between wild and F1 individuals, particularly in males, highlighting the downregulation of proteins related to spermatogenesis, flagellar assembly, and sperm–egg interaction. These findings confirm the presence of a molecularly based testicular dysfunction associated with incomplete maturation and reduced fertilization competence under farming conditions. Integration of these approaches showed that while metabolic pathways maintain correspondence between transcripts and proteins, reproductive pathways exhibit translational uncoupling, which partially explains the reduced reproductive competence observed in F1 males. The analysis of DNA methylation patterns provided an additional regulatory layer, revealing epigenetic modifications associated with origin that contribute to interpreting the variability observed between gene expression and protein abundance levels. This multi-omic uncoupling reflects a partial desynchronization of molecular regulation, likely influenced by artificial rearing conditions and the absence of natural environmental stimuli. Overall, this research provides an integrative view of the regulation of reproductive processes, establishing molecular bases to understand the mechanisms underlying the low reproductive performance of captive-bred F1 individuals of S. senegalensis. The findings contribute to the development of molecular biomarkers of gonadal maturity and fertility, including epigenetic regulators, as well as to the implementation of appropriate management and genetic selection strategies aimed at optimizing reproductive efficiency and sustainability in aquaculture. The multi-omics approach developed here consolidates a reference methodological framework for the study of reproductive physiology and domestication effects in marine species of aquaculture interest.

Esta tesis doctoral, centrada en la especie Solea senegalensis (Kaup, 1858), profundiza en la comprensión de mecanismos moleculares que regulan la reproducción, aportando evidencias sobre procesos asociados a la disfunción reproductiva en individuos nacidos en cautividad. Esta especie, de gran relevancia económica en la acuicultura europea y mediterránea, afronta importantes limitaciones reproductivas bajo condiciones de cultivo controlado, especialmente en individuos machos, lo que restringe la consolidación de su ciclo productivo completo. Mediante un enfoque multi-ómico integrador, la tesis combina análisis transcriptómicos, proteómicos y epigenómicos del tejido gonadal de machos y hembras con distinto origen (silvestre y F1), con el objetivo de caracterizar rutas biológicas que sustentan la maduración gonadal e identificar procesos desregulados asociados a la domesticación. El análisis transcriptómico permitió identificar redes génicas implicadas en la diferenciación sexual, la esteroidogénesis y la comunicación celular, evidenciando que la madurez y la fertilidad no dependen exclusivamente de genes estructurales, sino de una regulación coordinada entre vías metabólicas y neuroendocrinas. El estudio proteómico comparativo reveló diferencias significativas en la expresión proteica entre individuos silvestres y F1, especialmente en machos, destacando la subexpresión de proteínas vinculadas a la espermatogénesis, el ensamblaje flagelar y la interacción espermatozoide y ovocito. Estos resultados confirman la existencia de una disfunción testicular de origen molecular, asociada a la madurez incompleta y a la baja competencia fecundante en condiciones de cultivo. La integración de ambas aproximaciones mostró que, mientras las rutas metabólicas mantienen una correspondencia entre transcriptos y proteínas, las rutas reproductivas presentan un desacoplamiento traduccional que explica en parte la baja competencia reproductiva en los machos F1. El análisis de los patrones de metilación aportó una capa regulatoria adicional, evidenciando modificaciones epigenéticas asociadas al origen que contribuyen a interpretar la variabilidad observada entre niveles de expresión génica y proteica. Este desacople multi- ómico evidencia una desincronización parcial en la regulación molecular, posiblemente influida por condiciones artificiales del ambiente en cautividad y la ausencia de estímulos naturales. Esta investigación proporciona una visión integral de la regulación de procesos reproductivos, proporcionando bases moleculares para comprender los mecanismos implicados en la baja tasa reproductiva de individuos F1 cultivados de S. senegalensis. Los hallazgos obtenidos contribuyen al desarrollo de biomarcadores moleculares de madurez y fertilidad, incluyendo reguladores epigenéticos, así como la aplicación de métodos adecuados en el manejo y selección genética orientadas a optimizar la eficiencia reproductiva y sostenibilidad del cultivo. La aproximación multi-ómica desarrollada consolida un marco metodológico de referencia para el estudio de la fisiología reproductiva y de los efectos de la domesticación en especies marinas de interés acuícola.