Development of a rapid and accurate UHPLC-PDA-FL method for the quantification of phenolic compounds in grapes

Abstract

Las uvas son una gran fuente de compuestos fenólico, que tienen excelentes propiedades antioxidantes. Se necesitan métodos analíticos eficientes para determinar de forma selectiva y precisa el contenido de estos compuestos en las uvas. En este estudio, se ha desarrollado un método de cromatografía líquida de ultra-alta resolución (UHPLC) de fase reversa con detección de fluorescencia y matriz de fotodiodos para determinar y cuantificar 27 de los principales compuestos fenólicos presentes en las uvas. Se empleó una columna ACQUITY UPLC® BEH C18 (50 mm x 2,1 mm de diámetro interior, tamaño de partículas de 1,7 mm). Se desarrolló un método de gradiente y se optimizaron la temperatura de la columna (22-55 ºC), así como el caudal (0,6-0,75 mL min-1). Las condiciones óptimas permitieron la separación de todos los compuestos en menos de 9 min. El método fue validado y demostró excelentes límites de detección y cuantificación, precisión y selectividad. Finalmente, se estudiaron varias variedades de uva para demostrar la aplicabilidad del método al análisis de muestras de matriz real.

Grapes are a great source of phenolic compounds, which have excellent antioxidant properties. Efficient analytical methods are necessary to selectively and precisely determine these compounds content in grapes. In this study, a reverse-phase ultra-high performance liquid chromatography (UHPLC) method with fluorescence and photodiode array detection has been developed to determine and quantify 27 of the main phenolic compounds present in grapes. An ACQUITY UPLC® BEH C18 (50 mm × 2.1 mm i.d., 1.7 mm particle size) column was employed. A gradient method was developed and column temperature (25–55 °C), as well as flow rate (0.6–0.75 mL min−1), were optimized. The optimum conditions allowed the separation of all the compounds in less than 9 min. The method was validated and demonstrated excellent detection and quantification limits, precision, and selectivity. Finally, several grape varieties were studied in order to demonstrate the applicability of the method to the analysis of real matrix samples.